La dermatitis atópica (DA), es una enfermedad inflamatoria común de la piel con concurrencia común de afecciones atópicas. Si bien los estudios identificaron con éxito los biomarcadores de DA asociados con varios subtipos de DA, como el origen étnico, las mutaciones genéticas, la DA intrínseca versus la extrínseca, la comorbilidad y la gravedad de la enfermedad, los biomarcadores deben de caracterizarse mejor.
La piel inflamada en la DA en los adultos representa una respuesta inmune tipo 2 junto con la deficiencia de proteínas estructurales, como la filagrina. Los estudios indican similitudes inmunológicas y diferencias importantes entre la DA pediátrica y la del adulto. Aunque los niños con DA comparten la vía dominada por la célula T cooperadora (Th) 2/Th22 que predomina en la piel adulta con DA, los niños con enfermedad de inicio temprano también muestran una actividad significativa de Th17 y carecen de la respuesta típica mediada por Th1 que a menudo se observa en adultos con DA crónica.
Los estudios de biomarcadores cutáneos se realizaron con tejido de piel obtenido con biopsias cutáneas. Los avances recientes en el uso de tiras de cinta cutánea no invasivas facilitaron la recolección de tejidos en niños pequeños con DA, donde las biopsias de piel pueden ser difíciles de recolectar. Los estudios que utilizan tiras de cinta ya incrementaron el conocimiento sobre los biomarcadores clave en la DA en la edad pediátrica, sin embargo, existe una intervariabilidad considerable entre los estudios, que podría relacionarse con diferentes métodos de muestreo y análisis. Las diferencias también podrían relacionarse con los subtipos de DA en la edad pediátrica, ya que el perfil de citocinas difiere de manera considerable entre los niños con DA y con/sin alergia alimentaria. Mientras que los diferentes subtipos de DA son muy relevantes para incluir en los estudios al determinar los biomarcadores de la DA pediátrica. Sin embargo, pocos estudios realizan esto hasta ahora.
Se examinaron los biomarcadores en la piel lesional y no lesional en niños daneses con DA mediante el uso de diferentes métodos de muestreo y análisis. Por lo tanto, se compararon los niveles relativos de biomarcadores representados por los niveles de ARNm en el tejido de piel completa y los niveles de proteínas en las tiras de cinta de piel, y se examinó si estos niveles diferían con la gravedad de la DA, el gen de la filagrina (FLG) y la alergia alimentaria.
2 | MATERIALES Y MÉTODOS
2.1 | Características de los pacientes
Veinticinco niños de ascendencia europea de 2 a 14 años con DA, se reclutaron en el Departamento de Dermatología y Alergia del Hospital Herlev-Gentofte, Copenhague, Dinamarca. A estos niños no se les permitió utilizar los siguientes: antibióticos orales, inmunosupresores sistémicos o fototerapia en las últimas 4 semanas antes de la recolección de la muestra; corticoesteroides tópicos en los últimos 3 días antes del muestreo; cremas hidratantes o bañarse dentro de las 12 horas previas a la toma de muestras. Se excluyeron los niños con infección cutánea. Las comorbilidades atópicas se definieron como asma diagnosticada por el médico (sólo niños >5 años) y rinitis alérgica (sólo niños >10 años). La alergia alimentaria se definió como una reacción clínica inmediata reportada por los padres tras la ingesta de huevo, leche, trigo o cacahuate junto con una prueba cutánea por punción positiva o inmunoglobulina E específica (IgE) positiva al alérgeno relacionado. La gravedad de la DA se evaluó por el Índice de Área y Gravedad del Eccema (EASI), y la gravedad del eccema en el área de muestreo por la puntuación de Puntuación Total de Signos (TSS). Se utilizó una versión modificada de TSS que incluía 5 signos: eritema, edema, liquenificación, descamación/sequedad y excoriación clasificada por una escala de 4 puntos (0, ausente; 1, leve; 2, moderada; 3, grave) con una puntuación máxima de TSS de 15. El estudio se realizó de acuerdo con los principios de la Declaración de Helsinki y el estudio se aprobó por el comité regional de ética (H- 18000232) y la Agencia Danesa de Protección de Datos (VD-2019-11). Se obtuvo el consentimiento informado de ambos padres y se requirió el consentimiento por escrito de al menos uno de los padres antes de la inclusión.
2.2 | Muestreo de tejido
La cinta utilizada en el estrato córneo se realizó mediante el uso de tiras de cinta (3.8 cm2, estándar D-Squame, Monaderm, Mónaco, Francia) unidas a la piel durante 10 segundos con una presión estandarizada (225 g cm−2) mediante el uso del instrumento de presión D-Squame D500 (CuDerm, Dallas, TX, EE. UU.). De manera secuencial, se tomaron muestras de 10 cintas consecutivas del mismo sitio de la piel. La cantidad total de proteína se midió en cada cinta por la densidad óptica (DO) mediante el uso de D-Squame Scan 850 A. Las tiras de cinta se colocaron de manera inmediata en un crio-vial y se almacenaron a - 80 ° C. El muestreo de piel lesionada se realizó en i) flexión del codo, o si no hay DA en la flexión del codo ii) de acuerdo con el siguiente orden; antebrazo, flexión de rodilla, muslo, abdomen, flancos, espalda, glúteos, cuello y cara. Se tomaron muestras de piel no lesional de la misma región anatómica separada por al menos 10 cm del área de muestreo de piel lesional.
Se tomó una biopsia de piel de 2 mm junto a las tiras de cinta lesional. Los tejidos de la piel se transfirieron de manera inmediata a las crioviales con una solución de estabilización RNAlaterTM preenfriada y se almacenaron a -80 ° C hasta la purificación del ARN.
2.3 | Análisis tisular de tiras de cintas cutáneas
Niveles epidérmicos de 17 mediadores inmunológicos preespecificados; la interleucina (IL) -1α, IL-1β, IL-4, IL-5, IL-8, IL-10, IL-13, IL-17A, IL-18, IL-22, IL-31, IL-33, quimiocina cutánea que atrae células T (CTACK), interferón-γ (INF-γ), quimiocina regulada y activada del timo (TARC), linfopoyetina estromal tímica (TSLP), factor de necrosis tumoral-α (TNF- α), se determinaron en la 4ª, 6ª y 10ª cinta y se agruparon antes del análisis. Para mantener el orden de clasificación, a las muestras bajo el límite de detección se les asignó la mitad del valor de la concentración de muestra más baja por debajo del límite de detección.
Los factores hidratantes naturales (FHN) se definieron como la suma de las concentraciones de los tres componentes ácido pirrolidona-5-carbolix, histidina e isómeros cis y trans del ácido urocálico. Los niveles de FHN se determinaron en la 5ª cinta. Los niveles de citocinas y FHN se corrigieron para la cantidad total de proteína de las mediciones de DO.
2.4 | Análisis de tejido en biopsia de piel
La extracción de ARN, la síntesis de ADNc y el análisis de qPCR en tiempo real (TR) se realizó en Eurofins Genomics Europe Genotyping A/S, Aarhus, Dinamarca. El ARN se extrajo y purificó de los tejidos de la piel mediante el proceso automático en el robot QIAsymphony SP con el kit de ARN QIAsymphony (QIAGEN, Hilden, Alemania). La síntesis de ADNc se realizó mediante un kit de transcripción inversa de ADNc de alta capacidad de acuerdo con la recomendación del fabricante (Applied Biosystems; ThermoFisher Scientific, Waltham, MA, Estados Unidos). Se analizó un conjunto idéntico de biomarcadores que en las tiras de cinta cutánea (Tabla S1). Se realizaron amplificaciones de objetivos específicos mediante el uso de ensayos de TaqMan (TaqMan; ThermoFisher Scientific) y también se utilizaron en la subsiguiente qPCR. Los ensayos y el ADNc amplio se colocaron en una matriz dinámica y se procesaron de acuerdo con el protocolo del fabricante en condiciones estándar en el sistema Fluidigm BioMark. Los datos se analizaron con el programa Fluidigm BioMark versión 4.1.3 con corrección basal lineal (derivada) y el método de usuario (detectores) para la configuración del umbral Ct. Los valores promedio de Ct se calcularon a partir de datos sin procesar junto con la linealidad de la curva estándar del ensayo y la eficiencia de amplificación. Los niveles de ARNm se determinaron mediante el método de cuantificación relativa (2^-2(∆∆Ct)), con HMBS como gen de referencia.
2.5 | Genotipado de filagrina
Los niños se genotiparon para mutaciones comunes del gen FLG en la población del norte de Europa (R501X, 2282del4 y R2447X) mediante el ensayo de genotipado TaqMan. Las muestras se recogieron mediante hisopos bucales (Isohelix, Harrrietsham, Reino Unido).
2.6 | Análisis estadístico
Los análisis estadísticos se analizaron con el programa R versión 3.6.0 (http://www/R-project.org/). La diferencia en los niveles de biomarcadores entre los grupos se determinó mediante la prueba de rango firma de Wilcoxon. Las correlaciones entre los biomarcadores y los datos continuos (EASI, TSS) se determinaron mediante la correlación de Spearman para los datos no paramétricos. Para comparar los niveles de respuesta inmune en tiras de cinta y biopsias, se realizó un análisis de correlación con los valores individuales en relación con el paciente con la expresión general más baja, que es la misma para las tiras de cinta y los niveles de ARNm (ID25). Los valores se corrigieron para múltiples análisis por el método de Benjamini-Hochberg.
3 | RESULTADOS
3.1 1 Demografía
Veinticinco niños, 12 niñas y 13 niños con una mediana de edad de 9 años (IQR 5-11) se inscribieron (Tabla 1). La gravedad de la DA varió de leve a grave (media de EASI, 9.3, DE 6.6). Once niños tenían DA leve (EASI 0-7), 12 moderada (EASI 7.1-20.9) y 2 graves (EASI >21). Se observó comorbilidad atópica en 14 niños; asma comórbida (n = 8), rinitis alérgica (n = 9) y alergia alimentaria (n = 8), y 11 niños no presentaron comorbilidad atópica (Tabla 1, Tabla S2). Ocho niños tenían al menos una mutación FLG, con dos homocigotos (R501X/R501X) y seis portadores de mutaciones heterocigotas (uno para R2447X y cinco para 2282del4). No hubo diferencias en la edad o EASI entre los participantes con y sin mutaciones FLG, comorbilidad atópica o alergia alimentaria sola (datos no mostrados).
3.2 | Recolección de tejido
Veinticinco biopsias de piel se recolectaron, del antebrazo (n = 18), la pierna (n = 5) y de la zona lumbar (n = 2). Se recogieron tiras de cinta de piel del antebrazo (n = 17), la pierna (n = 6) y el área lumbar (n = 2). La recolección de tiras de cinta de piel no lesional no fue posible en dos niños. Las puntuaciones de TSS tuvieron un resultado similar en las áreas de la piel de tejido a las tiras de cinta (media, 5; DE 1.89) y biopsias de piel (media, 4.96; DE 1.57) (cuadro 1, cuadro S3).
3.3 | Análisis de citocinas en biopsias de piel lesionada con DA
De los 17 mediadores inmunomoduladores medidos, se logró una tasa de detección de 93% en biopsias de piel. La IL-17α se excluyó de un análisis adicional ya que >30% de las muestras se presentaron bajo el límite de detección. El perfil inmunológico en las biopsias de piel se denominó por una expresión alta de biomarcadores relacionados con Th2 y una expresión baja de marcadores de inflamación innata (Figura S3). Al comparar la expresión media relativa de ARNm de cada nivel de biomarcador, varias citocinas relacionadas con Th2 (IL-5, IL-13 e IL-31) aumentaron de manera significativa en comparación con los marcadores de la respuesta innata (IL-1α, IL-8 e IL-18) (Figura S3). La Il-4 mostró la expresión más baja de todos los biomarcadores examinados. No se encontró correlación entre los biomarcadores en las biopsias de piel y los subtipos de DA, incluida la gravedad de la DA, las mutaciones FLG o la alergia alimentaria (Tablas 2 y 3).
3.4 | Análisis de citocinas en tiras de cinta de la piel lesionada con DA
En las tiras de cinta de piel lesional, se logró una tasa de detección de 95% y se incluyeron los 17 analitos en el análisis. La piel lesional muestra una expresión alta de TARC y marcadores de inflamación innata general (IL-1β, IL-8 y TNFα), y expresión baja de biomarcadores relacionados con Th2 (IL-4, IL-5, IL-13, IL-31 e IL-33) (Figura 1). Varias citocinas en la piel lesional se correlacionaron de manera significativa con la gravedad de la DA medida por EASI (Tabla 2). La asociación más fuerte se observó para TARC (R = 0.4, P = .0007) y CTACK (R = 0.4, P = .002) seguida por las citocinas relacionadas con la vía de inflamación innata general (IL-8, R = 0.3, P = .041 e IL-18, R = 0.3, P = .04) y TSLP (R = 0.3, P = .046). La TSS se correlacionó con un panel similar de biomarcadores (IL-8, R = 0.3, P = .01; TSLP, R = 0.4, P = .01; CTACK R = 0.4, P = .002 y TARC R = 0.5, P = .00002) y fue más predominante para TARC, en comparación con EASI (P = .0007).
Se observó una correlación positiva entre TSS e IL-1α (R = 0.3, P = .01), mientras que IL- 31 (R = −0.3, P = .01), IL-33 (R = −0.5, P = .00002) e IL-17α (R = −0.3, P = .01) mostraron una correlación inversa. En la piel lesional, FHN y TSLP (R = −0.4, P = .004), IL-31 (R = −0.4, P = .009) e IL-33 (R = −0.32, P = .03) presentaron una correlación inversa. Los niños con mutaciones FLG mostraron niveles elevados de marcadores Th2 (TARC, P < .05; CTACK, P < .05 e IL-13, P < .05) en comparación con los portadores de tipo salvaje (Tabla 3). Los niños con alergia alimentaria presentaron niveles más bajos de IL-33 (P < .0001) e IL-17α (P < .05) en comparación con los niños sin alergia alimentaria. No se encontraron diferencias para los niños con o sin otras comorbilidades atópicas (Tabla 3). Se examinó la correlación entre EASI y la respuesta inmune en tiras de cinta estratificadas por genotipo FLG (Figura 2). Los biomarcadores de gravedad de la DA mostraron una correlación más fuerte con EASI en portadores de tipo salvaje (IL-18 (R = 0.2, P = .09), CTACK (R = 0.15, P = .31)) en comparación con niños con mutaciones FLG (IL-18 (R = -0.1, P = .6), CTACK (R = 0.07 P = .7)) (Figura 2). No se observaron diferencias para los niveles de TARC entre los niños con mutaciones FLG (R = 0.4, P = .07) y los portadores de tipo salvaje (R = 0.2, P = .13). Se observó una relación inversa para IL-17α y EASI, donde los niños con mutaciones FLG mostraron una correlación positiva (R = 0.3, P = .1), y los portadores de tipo salvaje una correlación negativa (R = −0.2, P = .2).
3.5 | Análisis de citocinas en tiras de cinta de piel no lesionada con DA
En tiras de cinta de piel no lesional, se logró una tasa de detección de 93%. La piel no lesional mostró una expresión alta de IL-1α, IL-31 e IL-33 (Figura 1). Se observo una relación positiva significativa entre EASI y varias citocinas con la asociación más fuerte para IL-1β (R = 0.6, P = .00000005), seguida de IL-8 (R = 0.6, P = .0000008), CTACK (R = 0.5, P = .00009), TARC (R = 0.5, P = .00009) e IL-18 (R = 0.4, P = .0006) (Tabla 2). El FHN mostró una relación inversa con varios biomarcadores, entre; IL-1β (R = −0.6, P = .000004), IL-8 (R- 0.54 = , P = .00001) y TARC (R = −0.48, P = .0002). En la piel no lesional, los niños con mutaciones FLG mostraron niveles elevados de marcadores de inflamación innata general (IL-1β, P < .01; IL-8, P < .05 e IL-18, P < 0.01) en comparación con los portadores de tipo salvaje (Tabla 3). Los niños con alergia alimentaria tuvieron una respuesta inmune distinta en comparación con los que no la tuvieron, y mostraron niveles mayores significativos de IL- 8 (P < .01), IL-18 (P < .01), TARC (P < .01) y CTACK (P < .01) IL- 17α (P < .05). No se encontraron diferencias para otras comorbilidades atópicas.
3.6 | Comparación de la respuesta inmune en tiras de cinta con piel lesionada y no lesionada
En total, 11 de los 17 biomarcadores examinados difirieron de forma significativa entre la piel lesional y no lesional (Figura 1) ilustrados por una formación de grupo distinta en los datos del mapa de calor (Figura S1). La piel lesional mostró niveles más altos de IL-1β (P < 0.05), IL-8 (P < .0001), IL-18 (P < .0001), CTACK (P < .0001) y TARC (P < .0001) junto con IL-22 (P < .01), mientras que la piel no lesional mostró mayores niveles de IL-1α (P < .0001), IL-17α (P < .001), IL-31 e IL-33 (P < .0001) (Figura 1). No se encontraron diferencias significativas entre los sitios de la piel para TNF-α, IFN-γ, IL-4, IL-5, IL-10 e IL- 13.
3.7 | Correlación entre los niveles de citocinas de ARNm en biopsias de piel y los niveles de citocinas de proteínas en tiras de cinta
Para examinar si el perfil de citocinas se correlacionaba entre las tiras de cinta cutánea y las muestras de biopsia de piel, se comparó la expresión media de los niveles de citocinas de ARNm en las biopsias con los niveles de citocinas de proteínas en las tiras de cinta. En general, el perfil de citocinas difirió de manera considerable entre los dos tipos de muestreo (Figura 3) donde la respuesta inmune en la biopsia de piel estuvo dominada por una respuesta tipo Th2, mientras que las tiras de cinta mostraron un dominio de las citocinas mediadas por IL-1, TARC y CTACK. Para terminar, en un análisis de correlación entre los niveles relativos de ARNm y proteínas, sólo IL-22 (R = 0.6, P = .007) mostró una asociación significativa entre las muestras elevadas en ambas (Figura S2).
4 | DISCUSIÓN
Se examinaron los biomarcadores en tiras de cinta y biopsias de piel recolectada de 25 niños de ascendencia europea con DA. Se analizaron 17 marcadores inmunológicos de la vía innata, Th1-, Th2-, Th17-, y Th22-, y se logró una tasa de detección de 95% de cintas lesionadas, 93% de cintas no lesionadas y 93% de biopsias de piel.
En la piel lesionada con DA, las biopsias de piel presentaron una respuesta inmune típica asociada a Th2, mientras que las tiras de cinta de la piel lesionada y no lesionada mostraron una respuesta inmune inversa con expresión baja de mediadores Th2 y una expresión alta de marcadores generales de inflamación innata (IL-1α, IL-1β, IL-8, IL-18) junto con TARC y CTACK. Las muestras de tiras de cinta fueron superiores en comparación con las biopsias de piel en la detección de diferencias en los biomarcadores basados en la gravedad de la DA, las mutaciones FLG y la alergia alimentaria. Los datos sugieren que TARC y CTACK, seguidos de IL-8 e IL-1, recopilados por medio de cintas representan biomarcadores clave asociados con la gravedad de la DA en niños.
Las diferencias observadas en el perfil inmunitario entre las tiras de cinta y las biopsias de piel pueden relacionarse con diferencias en la composición de la muestra obtenida o en la expresión de proteínas y ARNm. La biopsia incluyó citocinas de la dermis y la epidermis, mientras que las citocinas en las tiras de cinta se originan en el estrato córneo. Los biomarcadores medidos en tiras de cinta son los niveles de proteína (es decir, ARNm traducido), mientras que los biomarcadores en biopsias de piel son los niveles de ARNm. La expresión baja de citocinas mediadas por Th2; IL-4, IL-5, IL-31 e IL-33 en las tiras de cinta adhesiva indican que la producción y el funcionamiento de estas citocinas funcionan en capas más profundas de la piel, o que se afectaron por citocinas de la respuesta inmune innata en el estrato córneo. Mientras que otro estudio encontró una correlación pobre entre los niveles de proteína en las cintas y el ARNm en las biopsias de piel, un estudio que comparó los niveles de proteínas y ARNm en las biopsias de piel encontró una buena correlación general. Las discrepancias observadas en este estudio es más probable que se relacionen con las capas de piel recolectadas más que en las diferencias en la expresión de proteínas y ARNm. Se tomaron muestras de tiras de cinta y biopsias de piel en la misma área anatómica y la gravedad local del eccema no difirió entre los grupos. Por lo tanto, es poco probable que las diferencias observadas sean atribuibles a características divergentes en el área muestreada.
Se encontró una correlación significativa entre la gravedad de la DA y los biomarcadores analizados en las tiras de cinta, pero no en las biopsias de piel. Los biomarcadores que mostraron una asociación significativa con la gravedad de la enfermedad en tiras de cinta fueron los marcadores Th2 TARC, CTACK y TSLP y los marcadores de inflamación innata, IL-1β, IL-8, IL-18. En las lesiones de DA, TARC se expresa en queratinocitos epidérmicos, células infiltrantes dérmicas y células endoteliales. De forma previa, TARC demostró ser el biomarcador más prometedor de la gravedad de la DA en adultos, y los estudios confirmaron una correlación entre los niveles de TARC en suero y la gravedad de la DA en niños. En el estudio, TARC mostró una correlación significativa con la gravedad de la DA en la piel despojada con cinta lesional y no lesional y tendió a ser significativa en las biopsias de piel. Esto enfatiza el papel de TARC como un biomarcador clave de la gravedad de la DA en la DA pediátrica. Estos hallazgos se respaldaron por dos estudios previos que utilizaron proteómica de tiras de cinta en niños con DA. TSLP y CTACK, y marcadores de inflamación innata (IL-1β, IL-8 e IL-18), también mostraron una correlación positiva con la gravedad de la DA en el estudio. Estos hallazgos se correlacionan bien con hallazgos anteriores, lo que enfatiza su papel como biomarcadores importantes de la DA pediátrica. La TSS identificó biomarcadores adicionales relacionados con la gravedad del eccema, entre estos IL-α. Esta citocina se correlaciona con la gravedad de la DA en niños y se libera de los corneocitos tras el daño de la piel.
Los subtipos de DA muestran distintos perfiles de citocinas. Por ejemplo, los pacientes adultos con mutaciones FLG muestran una mayor expresión de citocinas IL-1 en comparación con los portadores de tipo de novo. Se reportaron diferencias en niños de diferentes genotipos, incluidas alteraciones en el metabolismo de los lípidos y una mayor respuesta mediada por interferón tipo 1 en portadores de mutaciones de novo y FLG, de manera respectiva. Un estudio reciente, que evaluó la piel de niños de 8 a 16 años con DA, encontró que la alergia alimentaria mostró una respuesta inmune única caracterizada por una mayor expresión de Th2 (IL-4R y TSLP) y una disminución de la expresión de filagrina, en comparación con los niños sin alergia alimentaria. Se encontró que los subtipos de DA mostraron una respuesta inmune distinta. Los niños con mutaciones FLG tenían niveles más altos de marcadores Th2 (TARC, CTACK e IL-13) en la piel lesional y niveles más altos de marcadores de inflamación innata general (IL-1β, IL-8 e IL-18) en la piel despojada de cinta no lesional en comparación con los portadores de tipo de novo. Los niños con alergia alimentaria mostraron una respuesta inmune distinta en comparación con los niños sin ella, caracterizada por una elevación de la expresión de Th2 (CTACK, TARC), IL-8 e IL-18 y una disminución de los niveles de FHN. En particular, estas diferencias fueron más pronunciadas de manera principal en la piel no lesional en línea con los hallazgos anteriores. Los niños con alergia alimentaria parecen tener una respuesta inflamatoria más generalizada que también involucra a la piel que no se encuentra afectada de manera clínica, lo que podría tener implicaciones terapéuticas. A pesar de que una minoría de los niños con alergia alimentaria tenían mutaciones FLG en el estudio, se observa un perfil de citocinas similar, el cual se caracteriza por una elevación de los niveles de IL-8 e IL-18 y una disminución de los niveles de FHN. Mientras que algunos estudios encontraron una asociación entre la mutación FLG y la alergia alimentaria. En ratones con deficiencia de filagrina, la sensibilización epicutánea a los alimentos se mejora secundario a una mayor penetración de alérgenos epidérmicos y, en consecuencia, una elevación de la respuesta mediada por Th2. Los niveles más bajos de productos de descomposición de filagrina en niños con alergia alimentaria podrían relacionarse con una elevación de la respuesta Th2 o alteraciones genéticas. Por lo tanto, ya sea que la deficiencia de filagrina se adquiera o se herede de forma genética, es probable que desempeñe un papel importante en el desarrollo de la alergia alimentaria y podría explicar las similitudes observadas en el perfil de citocinas entre los niños con mutación FLG y alergia alimentaria. Cabe destacar que todos los biomarcadores que se correlacionaron con mutaciones FLG o alergia alimentaria, están presentes en forma principal en el estrato córneo superior, lo que podría explicar la falta de una correlación entre los biomarcadores de biopsia de piel y los subtipos de DA.
La respuesta inmune en relación con EASI difirió de manera considerable entre los niños con y sin mutaciones FLG. Si bien se observó una correlación positiva entre los biomarcadores (CTACK e IL-18) y el EASI en portadores de tipo salvaje, estos marcadores mostraron una relación inversa en niños con mutaciones FLG. Estos hallazgos sugieren que los biomarcadores relacionados con la gravedad de la DA difieren entre los subtipos de FLG. En particular, las mayores diferencias entre los subtipos se observaron en la piel no lesional. Una posible explicación podría ser que el nivel alto de inflamación en las lesiones de DA enmascara las diferencias inmunológicas subyacentes. Los hallazgos se respaldaron por un estudio previo, lo que enfatiza la importancia de incorporar muestras no lesionales en estudios futuros que examinen biomarcadores de DA pediátrica. En este estudio se centró en los niños con DA de ascendencia europea, en estudios futuros se debe examinar a los niños de ascendencia no europea con y sin DA.
El estudio tiene algunas limitaciones, como un tamaño pequeño de muestra. Esto limita la generalización de los resultados, en especial en el análisis de subgrupos de la mutación FLG y la alergia alimentaria. Sin embargo, el tamaño total de la muestra está en línea con estudios anteriores. La mayoría de los niños incluidos tenían DA leve a moderada, y sólo dos niños tenían DA grave. Por lo tanto, los biomarcadores deben validarse en niños con DA grave. Se presentó una tasa de detección de 93% en la biopsia de piel, lo que garantiza que una biopsia de piel de 2 mm proporciona material suficiente para el análisis de un espectro que se limita a 17 mediadores. Los niveles bajos de detección de IL- 17α en muestras de biopsia de piel, posiblemente se relacionaron con un error metodológico en lugar de niveles bajos reales. En la biopsia de piel, no se observó correlación entre los biomarcadores y la gravedad de la DA medida por EASI. Un estudio previo encontró una asociación significativa entre IFN-α y EASI, así como IFN-α, TSLPR, CCL18 e IFN-γ y SCORAD en función de biopsias de piel recolectadas de niños con DA. Si bien IFN-α y CCL18 no se examinaron en el estudio, no se pudo explicar la falta de correlación con TSLP e IFN-γ. Es posible que el hecho de que el SCORAD sea una puntuación compuesta para la gravedad de la DA conduzca a correlaciones diferentes a la puntuación objetiva de EASI. Para una comparación óptima, se debió de incluir muestras de biopsia de piel no lesional. Los participantes podían usar la terapia tópica hasta tres días antes del muestreo, lo que sesga la respuesta inmunológica. Sin embargo, el efecto inmunosupresor después de dos semanas de tratamiento tópico con furoato de mometasona al 0.1% en adultos no tuvo ningún efecto sobre el perfil de citocinas en tiras de cinta, pero dio lugar a la supresión de IL-13 e IL-4R en la biopsia de piel. En el estudio, la expresión de IL-4 es baja, pero la IL-13 es una de las citocinas más expresadas en muestras de biopsia de piel. Por lo tanto, el tratamiento tópico no tuvo un efecto considerable en los resultados.
5 | CONCLUSIONES
Las tiras de cinta mostraron ser superiores en comparación con las biopsias de piel en la detección de diferencias en los biomarcadores basados en la gravedad de la DA, las mutaciones FLG y la alergia alimentaria. Estos hallazgos enfatizan la utilidad de las tiras de cinta como un método futuro para examinar biomarcadores en la piel pediátrica con DA.
Assessment of biomarkers in pediatric atopic dermatitis by tape strips and skin biopsies
Centro Regional de Alergia e Inmunología Clínica CRAIC, Hospital Universitario “Dr. José Eleuterio González” UANL, Monterrey, México
Dra. med. Sandra Nora González Díaz Jefe y Profesor
Dra. Rosalaura Virginia Villarreal González Profesor
Dr. Daniel Eduardo Verduzco Félix Residente 1er Año
Dra. Alejandra Macías Weinmann Profesor
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